本品由 SN-甘油-3-磷酸膽堿與油酸反應、純化制備而得。按無水物計算，含二油酰磷脂酰膽堿（C44H84NO8P）應為 98.0%~102.0%。

【性狀】本品為白色或類白色塊狀物。

過氧化值 本品的過氧化值（通則 0713）應不大于 5。

【鑒別】在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。

【檢查】有關物質 取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每 1ml 中含 10mg 的溶液，作為供試品溶液。

取油酰磷脂酰膽堿（LOPC）、油酸與二油酰磷脂酰膽堿（DOPC）對照品各適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每 1ml 中分別含 100μg、50μg、10μg 的混合溶液，作為對照品溶液（1）~（3）。

其中對照品溶液（3）作為靈敏度溶液。

另取生育酚對照品適量，加對照品溶液（1）溶解并稀釋制成每 1ml 中含 100μg 的溶液，作為系統適用性溶液。

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑（推薦選用4.6×250mm，5μm，300? 色譜柱），流動相 A 為 0.05%甲酸水溶液，流動相 B 為甲醇；柱溫為 35℃；用蒸發光散射檢測器檢測；按下表進行梯度洗脫。

取系統適用性溶液 20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，出峰順序依次為 LOPC、油酸、生育酚和 DOPC，LOPC 和油酸之間的分離度不得低于 5.0，理論板數按 DOPC 峰計算應不低于 3000。

精密量取靈敏度溶液 20μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，LOPC 和油酸信噪比不得小于10。

再精密量取對照品溶液（1）~（3）各 20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度的對數值與相應峰面積的對數值計算回歸方程，相關系數（r）應不小于 0.99。

精密量取供試品溶液 20μ1 注入液相色譜儀，用回歸方程計算有關物質的含量，其中其他雜質用 DOPC 回歸方程計算。

除 RRT 0.9~1.1 之間的峰和生育酚外，供試品溶液色譜圖中 LOPC 相鄰異構體峰面積應合并計算，含油酰磷脂酰膽堿（LOPC）不得過 0.5%，油酸不得過 0.3%，其他單個雜質不得過0.3%，有關物質總量（各雜質之和）不得過 2.0%。 

生育酚 取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每 1ml 中含 10mg 的溶液，作為供試品溶液。

另取生育酚對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每 1ml 中約含 10μg 的溶液，作為對照品溶液。

照含量測定項下的色譜條件，檢測波長為 292nm，精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，含生育酚不得過 0.1%。

油酸純度 取本品約 40mg，置 50ml 回流瓶中，加 0.5mol/L 氫氧化鈉甲醇溶液 4ml，在水浴中加熱回流 20 分鐘，放冷，加 14%三氟化硼甲醇溶液 5ml，再在水浴中加熱回流 2 分鐘，放冷，加異辛烷 4ml，繼續在水浴中加熱回流 1 分鐘，放冷，加飽和氯化鈉溶液 10ml，搖勻，靜置使分層，取上層液，經無水硫酸鈉干燥，作為供試品溶液。

分別取硬脂酸甲酯、棕櫚酸甲酯和油酸甲酯適量，用異辛烷溶解并稀釋制成每 1ml 中各約含 0.1mg 的溶液，作為系統適用性溶液。 

照氣相色譜法（通則 0521）試驗，用聚乙二醇（或極性相近）為固定相的毛細管色譜柱，起始溫度為 70℃，維持 2 分鐘，以每分鐘 5℃的速率升溫至 240℃，維持 25 分鐘；進樣口溫度為 220℃，檢測器溫度為 260℃。

精密量取系統適用性溶液 1μl 注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，棕櫚酸甲酯和硬脂酸甲酯峰相對于油酸甲酯峰的保留時間分別為 0.87 和 0.99，理論板數按油酸甲酯峰計算不低于 10000，各色譜峰間的分離度均應符合要求。

精密量取供試品溶液 1μl 注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法以峰面積計算油酸的含量，含油酸應不少于 98.0%。

游離脂肪酸 取本品 1.0g，置錐形瓶中，加乙醇-乙醚（1：1）（臨用前加酚酞指示液0.1ml，用 0.05mol/L 氫氧化鈉溶液滴定至微顯粉紅色）20ml，振搖使溶解，用氫氧化鈉滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液顯紅色，消耗氫氧化鈉滴定液（0.05mol/L）的體積不得過 0.4ml。

水分 取本品適量，照水分測定法（通則 0832 第一法 1）測定，含水分不得過 2.0%。

微生物限度 取本品 10g，依法檢查（通則 1105 與通則 1106），加 10g 聚山梨酯 80 溶解，加入 pH7.0 無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至 100ml，混合均勻，制成 1:10 供試液。

取 1:10 供試液 10ml，加入 90ml pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，均質混勻，作為 1:100供試液。

取 1:100 的供試液 2ml，等量加入 2 皿（1ml/皿）中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基，合并計數，測定需氧菌總數；取 1:10 的供試液 1ml，加入平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基，測定霉菌和酵母菌總數；取 1:10 供試液 10ml，加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養基檢查大腸埃希菌；取本品 10g，加入 200ml 胰酪大豆胨液體培養基中檢查沙門菌，依法測定。

每 1g 供試品中，需氧菌總數不得過 102cfu，霉菌和酵母菌總數不得過 102cfu，不得檢出大腸埃希菌；每 10g 供試品中不得檢出沙門菌。

細菌內毒素 取本品，依法檢查（通則 1143），每 1g 二油酰磷脂酰膽堿中含內毒素的量應小于標示量。

【含量測定】照高效液相色譜法（通則 0512）測定。

用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相；柱溫為 35℃；用蒸發光散射檢測器檢測。精密量取對照品溶液（每 1ml 中含二油酰磷脂酰膽堿 0.4mg）20μl，注入液相色譜儀，理論板數按二油酰磷脂酰膽堿峰計算不低于 2000，重復進樣 5 次，二油酰磷脂酰膽堿峰面積的相對標準偏差應不大于 2.0%。

取二油酰磷脂酰膽堿對照品適量，精密稱定，分別用甲醇溶解并定量稀釋制成每 1ml 中約含二油酰磷脂酰膽堿 0.3mg、0.4mg 和 0.5mg 的溶液，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液 20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度的對數值與相應的峰面積對數值計算回歸方程，相關系數（r）應不小于 0.99。

另取本品約 200mg，精密稱定，置 50ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml，加甲醇稀釋至 50ml，搖勻，作為供試品溶液，同法測定，用線性回歸方程計算，即得。

【類別】脂質體膜材等。

【貯藏】遮光，密封，-20℃保存。

【標示】應標明每 1g 本品中含內毒素的量應小于的標示量。

二油酰磷脂酰膽堿標準草案起草說明

一、結構式、CAS 號、分子式和分子量 參考國內外相關品種規定。

二、性狀 外觀根據所收集樣品的實際情況擬定；溶解度基于安全性考慮，并根據各家企業內控標準和所收集樣品實際測定結果擬定。過氧化值采用通則 0713 脂肪與脂肪油測定法。

三、鑒別 以含量測定項下結果為依據擬定。

四、有關物質、生育酚 有關物質主要關注共性降解雜質油酰磷脂酰膽堿和油酸。色譜條件和限度均參考企業內控標準和所收集樣品實際測定結果擬定。生育酚為本品使用的抗氧化劑，因其在有關物質項下與其他雜質響應差異，采用紫外檢測器，作為特定雜質控制。

五、油酸純度 樣品前處理和限度參考企業內控標準和所收集樣品實際測定結果擬定，氣相色譜條件參考通則 0713 脂肪與脂肪油測定法擬定。

六、游離脂肪酸、水分 游離脂肪酸參考藥用輔料油酸鈉擬定，水分參考各家企業內控標準擬定。

七、微生物限度 參考通則 1107、指導原則 9202 以及各家企業內控標準擬定。其中本品為油溶性化合物，需使用聚山梨酯 80 進行溶解。

八、細菌內毒素 根據通則 1143 相關要求制訂。

九、含量測定 參考各企業內控標準和所收集樣品實際測定結果擬定。

十、類別、貯藏、標示 均參考各家企業內控標準以及樣品的實際結果擬定

來源：CDE

原文下載：二油酰磷脂酰膽堿藥用輔料標準草案公示稿.pdf