本品系由含有可高效表達(dá)人生長激素基因的工程化細(xì)胞，經(jīng)過發(fā)酵和純化后獲得的人生長激素，加入適宜穩(wěn)定劑和/或保護(hù)劑制成的無菌液體制劑。本品可含抑菌劑，不含抗生素。每 1mg 人生長激素相當(dāng)于 3.0IU。

1 基本要求

生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動(dòng)物等應(yīng)符合“凡例”的有關(guān)要求。

2 制造

2.1 工程細(xì)胞人生長激素工程化細(xì)胞名稱、來源及種子批檢定應(yīng)符合批準(zhǔn)的要求。2.2 原液

2.2.1 種子液制備

將檢定合格的工作種子批細(xì)胞接種于適宜的培養(yǎng)基（可含適量抗生素）中培養(yǎng)。2.2.2 發(fā)酵用培養(yǎng)基采用適宜的不含抗生素的培養(yǎng)基。

2.2.3 種子液接種及發(fā)酵培養(yǎng)

在滅菌培養(yǎng)基中接種適量種子液。在適宜的溫度下根據(jù)經(jīng)批準(zhǔn)的發(fā)酵工藝進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵液應(yīng)定期進(jìn)質(zhì)粒丟失率檢查（通則 3406）。

2.2.4 發(fā)酵液處理

用適宜的方法收集并處理菌體。

2.2.5 純化

采用經(jīng)批準(zhǔn)的純化工藝進(jìn)行純化，得到人生長激素原液。如需存放，應(yīng)規(guī)定溫度和時(shí)間。

2.2.6 原液檢定

按 3.1 項(xiàng)進(jìn)行。

2.3 半成品

2.3.1 配制與除菌

按經(jīng)批準(zhǔn)的配方配制稀釋液。將原液用稀釋液稀釋至所需濃度，過濾后即為半成品，保存于適宜的溫度。

2.3.2 半成品檢定

按 3. 2 項(xiàng)進(jìn)行。

2.4 成品

2.4.1 分批

應(yīng)符合生物制品分包裝及貯運(yùn)管理（通則 0239）規(guī)定。

2.4.2 分裝

應(yīng)符合生物制品分包裝及貯運(yùn)管理（通則 0239）及注射劑（通則 0102）有關(guān)規(guī)定。

2.4.3 規(guī)格

（1）0.4ml:0.66mg（2IU） （2）0.75ml:1mg（3IU） （3）1ml:1.33mg（4IU） （4）0.9ml:1.5mg（4.5IU） （5）0.5ml:1.66mg（5IU） （6）0.6ml:2mg（6IU） （7）0.8ml:2.66mg（8IU） （8）1ml: 3.33mg（10IU） （9）1.5ml: 5mg（15IU） （10）3ml: 5mg（15IU）（11）1.5ml:10mg（30IU）（12）3ml: 10mg（30IU）（13）1.5ml: 15mg（45IU）

2.4.4 包裝

應(yīng)符合生物制品分包裝及貯運(yùn)管理（通則 0239）及注射劑（通則 0102）有關(guān)規(guī)定。

3 檢定

3.1 原液檢定

3.1.1 外觀

應(yīng)為無色澄清或微濁液體。

3.1.2 鑒別

3.1.2.1 反相色譜法

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗(yàn)。

試劑 三羥甲基氨基甲烷緩沖液（Tris 緩沖液） 取三羥甲基氨基甲烷 6.05g，加水溶解并稀釋至 900ml，用 1mol/L 鹽酸溶液調(diào)節(jié) pH 至 7.5，并用水稀釋至 1000ml，搖勻。對照品溶液 取人生長激素對照品適量，加 Tris 緩沖液并制成每 1ml 中含人生長激素 2mg 的溶液。

供試品溶液 取人生長激素原液適量，照對照品溶液方法制備。

測定法 取對照品溶液和供試品溶液，按 3.1.3.1 相關(guān)蛋白項(xiàng)下的色譜條件試驗(yàn)，記錄色譜圖。

結(jié)果判定 供試品溶液色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品溶液色譜圖中主峰的保留時(shí)間一致。

3.1.2.2 凝膠色譜法

在 3.1.4 項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。

3.1.2.3 毛細(xì)管電泳法

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

供試品溶液 取人生長激素原液，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液，該溶液與對照品溶液等體積混合，搖勻。

電泳條件 同 3.1.3.3 項(xiàng)下電泳條件。

測定法 取供試品溶液，按 3.1.3.3 項(xiàng)下的條件試驗(yàn)，記錄電泳圖。

結(jié)果判定 在供試品溶液電泳圖中，人生長激素主峰應(yīng)為無分裂單一峰。

3.1.2.4 肽圖

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗(yàn)。

試劑 胰蛋白酶溶液 取經(jīng)甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）處理的胰蛋白酶適量，加 3.1.2.1 反相色譜法項(xiàng)下的 Tris 緩沖液溶解并制成每 1ml 含 2mg 的溶液。對照品溶液 取人生長激素對照品，加 Tris 緩沖液溶解并制成每 1ml 中約含 2mg的溶液。取此液 300μl、胰蛋白酶溶液 20μl 與 Tris 緩沖液 300μl，混勻，置 37℃4 小時(shí)，立即置-20℃終止反應(yīng)。供試品溶液 取人生長激素原液適量，必要時(shí)用 Tris 緩沖液稀釋至每 1ml 中約含2mg 的溶液，其他同對照品溶液方法制備。空白溶液 取人生長激素對照品適量，不加胰蛋白酶溶液，其他同對照品溶液方法制備。 

色譜條件 用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑（5～10μm），柱溫為 35℃；以 0.1%三氟乙酸溶液為流動(dòng)相 A，以含 0.1%三氟乙酸的 90%乙腈溶液為流動(dòng)相 B，按下表進(jìn)行梯度洗脫，流速為每分鐘 1.0ml；檢測波長為 214nm；進(jìn)樣體積 100μl。

測定法 取空白溶液、對照品溶液和供試品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

結(jié)果判定 排除空白溶液色譜峰后，供試品溶液肽圖應(yīng)與對照品溶液一致。

3.1.2.5 N 末端氨基酸序列

至少每年測定 1 次。采用氨基酸序列分析儀或其他適宜的方法測定，N 端序列應(yīng)為：F-P-T-I-P-L-S-R-L-F-D-N-A-M-L。

3.1.3 檢查

3.1.3.1 相關(guān)蛋白質(zhì)

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗(yàn)。

供試品溶液 取人生長激素原液適量，用 3.1.2.1 反相色譜法項(xiàng)下的 Tris 緩沖液稀釋并制成每 1ml 中約含 2mg 的溶液。

系統(tǒng)適用性溶液 取人生長激素對照品適量，用 Tris 緩沖液溶解并制成每 1ml 中約含 2mg 的溶液，過濾除菌，室溫放置 24 小時(shí)。

色譜條件 用丁基硅烷鍵合硅膠為填充劑（5～10μm)，柱溫為 45℃；以 Tris 緩沖液正丙醇（71:29)為流動(dòng)相，可調(diào)節(jié)流動(dòng)相中正丙醇比例使人生長激素主峰保留時(shí)間為30～36 分鐘，流速為每分鐘 0.5ml；檢測波長為 220nm；進(jìn)樣體積 20μl。系統(tǒng)適用性要求 系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中，人生長激素主峰與脫氨人生長激素峰之間的分離度應(yīng)不小于 1.0，人生長激素主峰的拖尾因子應(yīng)為 0.9～1.8。

測定法 取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的 2 倍。按面積歸一化法計(jì)算相關(guān)蛋白質(zhì)含量。限度不得大于 6.0%。

3.1.3.2 高分子蛋白質(zhì)

供試品溶液、色譜條件與系統(tǒng)適用性要求 見 3.1.4。

測定法 取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。保留時(shí)間小于主成分峰的峰均視為高分子蛋白質(zhì)峰，按面積歸一化法計(jì)算高分子蛋白質(zhì)含量。保留時(shí)間大于主成分峰的色譜峰忽略不計(jì)。

限度 不得大于 4.0%。 

3.1.3.3 電荷變異體

照毛細(xì)管電泳法（通則 0542）測定。對照品溶液 取人生長激素對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素1mg 的溶液。

系統(tǒng)適用性溶液 取人生長激素系統(tǒng)適用性對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

靈敏度溶液 取人生長激素對照品適量，加水定量稀釋成每 1ml 含人生長激素 20μg 的溶液。

供試品溶液 取本品，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

磷酸鹽緩沖液 取磷酸氫二銨 13.2g，加水 1000ml 使溶解，用磷酸調(diào) pH 至 6.0，過濾。

電泳條件 經(jīng)預(yù)處理 [依次用 1mol/L 氫氧化鈉溶液（配制后置玻璃瓶中存放 24 小時(shí)以上）、水、磷酸鹽緩沖液沖洗 20、10、20 分鐘]的未涂層熔融石英毛細(xì)管（有效長度至少 70cm，內(nèi)徑 50μm），毛細(xì)管柱溫 30℃；樣品盤溫度 4~8℃；進(jìn)樣前，依次用 0.1mol/L 氫氧化鈉溶液（配制后置玻璃瓶中存放 24 小時(shí)以上）、水、磷酸鹽緩沖液沖洗毛細(xì)管 2、3、6 分鐘；進(jìn)樣時(shí)，在壓力或真空下進(jìn)樣至少 5 秒，然后進(jìn)樣磷酸鹽緩沖液 1 秒。以磷酸鹽緩沖液作為電極液，電泳電壓為 217V/cm；檢測波長 200nm。可根據(jù)所用毛細(xì)管的長度和儀器種類，調(diào)整毛細(xì)管預(yù)處理程序和進(jìn)樣前沖洗程序；為滿足系統(tǒng)適用性要求，進(jìn)樣時(shí)間和壓力可適當(dāng)調(diào)整。 

系統(tǒng)適用性要求 系統(tǒng)適用性溶液圖譜應(yīng)與人生長激素系統(tǒng)適用性對照品說明書中所附圖譜相似，參考附圖進(jìn)行峰歸屬和峰面積積分，脫酰胺組分峰（I4，通常以峰簇形式出現(xiàn)，相對主峰保留時(shí)間約為 1.02~1.11）與主峰之間應(yīng)能檢出 I3 峰，I3 峰與主峰的分離度應(yīng)不小于 1.5；靈敏度溶液圖譜中，主峰信噪比應(yīng)不低于 10。 

測定法 取供試品溶液進(jìn)樣，記錄電泳圖至主成分峰遷移時(shí)間的 2 倍。在供試品溶液電泳圖中，按校正峰面積（峰面積與遷移時(shí)間之比）歸一化法計(jì)算總電荷變異體含量。限度 應(yīng)不得過 10.0%。

3.1.3.4 宿主菌 DNA 殘留量

依法測定（通則 3407）或采用經(jīng)驗(yàn)證并批準(zhǔn)的其他適宜方法，每 1mg 人生長激素中含宿主菌 DNA 殘留量不得過 1.5ng。

3.1.3.5 宿主菌蛋白質(zhì)殘留量

依法檢查（通則 3412、3414）或采用經(jīng)驗(yàn)證并批準(zhǔn)的其他適宜方法，每 1mg 人生長激素中宿主菌蛋白質(zhì)殘留量不得過 10ng。

3.1.3.6 殘余抗生素活性

如在生產(chǎn)（例如種子液制備）中使用抗生素，應(yīng)依法檢查（通則 3408），或按照經(jīng)驗(yàn)證并批準(zhǔn)的方法檢查，不應(yīng)有殘余氨芐西林或其他抗生素活性。

3.1.3.7 細(xì)菌內(nèi)毒素

依法檢查（通則 1143），每 1mg 人生長激素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于 5.0EU。

3.1.4 含量

照分子排阻色譜法（通則 0514）測定。

試劑 （1）0.063mol/L 磷酸鹽緩沖液 取無水磷酸氫二鈉 5.18g、磷酸二氫鈉 3.65g，加水 950ml，用磷酸或氫氧化鈉試液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0，用水制成 1000ml，搖勻。

（2）0.025 mol/L 磷酸鹽緩沖液 取 0.063mol/L 磷酸鹽緩沖液 100ml，用水稀釋至250ml，必要時(shí)調(diào) pH 值至 7.0。 

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液溶解并制成每1ml 中約含 1.0mg 的溶液。 

供試品溶液 取人生長激素原液適量，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液稀釋并制成每1ml 中約含人生長激素 1.0mg 的溶液。

 系統(tǒng)適用性溶液 取人生長激素單體-二聚體混合物對照品適量，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液溶解并制成每 1ml 中約含 1.0mg 的溶液。

 色譜條件 以適合分離質(zhì)量為 5000-60000Da 球狀蛋白的親水改性硅膠為填充劑；以異丙醇-0.063mol/L 磷酸鹽緩沖液（3:97）為流動(dòng)相；流速為每分鐘 0.6ml；檢測波長為214nm；進(jìn)樣體積 20μl。 

系統(tǒng)適用性要求 系統(tǒng)適用性色譜圖中，人生長激素單體峰與二聚體峰之間的分離度應(yīng)符合要求。 

測定法 取供試品溶液和對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

3.1.5 比活性

依法測定(通則 3537)，按下式計(jì)算結(jié)果，每 1mg 人生長激素的活性不得少于 2.0 IU。供試品生物學(xué)活性（IU/ml）=標(biāo)準(zhǔn)品生物學(xué)活性(IU/ml)×供試品相對效價(jià)×Ds/Dr式中：Ds 為供試品預(yù)稀釋倍數(shù)；Dr 為標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)稀釋倍數(shù)。供試品比活性（IU/mg）=供試品生物學(xué)活性（IU/ml）/供試品的人生長激素含量（mg/ml）。

3.2 半成品檢定

如需對原液進(jìn)行稀釋或加入其他輔料制成半成品，應(yīng)確定半成品的質(zhì)量控制要求，應(yīng)按如下檢項(xiàng)或經(jīng)批準(zhǔn)的檢項(xiàng)進(jìn)行。

3.2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素

依法檢查（通則 1143），每 1mg 人生長激素含細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)小于 5.0EU。

3.2.2 無菌

依法檢查（通則 1101 薄膜過濾法），應(yīng)符合規(guī)定。

3.3 成品檢定

3.3.1 外觀

本品為無色澄清或微濁液體。

3.3.2 鑒別

3.3.2.1 反相色譜法

供試品溶液、對照品溶液與色譜條件 見 3.3.3.3 相關(guān)蛋白項(xiàng)下。

測定法 取本品，按 3.3.3.3 項(xiàng)相關(guān)蛋白質(zhì)項(xiàng)下色譜條件試驗(yàn)。

結(jié)果判定 供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。

3.3.2.2 毛細(xì)管電泳法

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg的溶液。

供試品溶液 取本品適量，用水稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液，該溶液與對照品溶液等體積混合，搖勻。

電泳條件 同 3.1.3.3 項(xiàng)下電泳條件。

測定法 取供試品溶液，按 3.1.3.3 項(xiàng)下的條件試驗(yàn)，記錄電泳圖。

結(jié)果判定 供試品溶液電泳圖中，人生長激素主峰應(yīng)為無分裂單一峰。

3.3.3 檢查

3.3.3.1 pH 值

取本品，依法測定（通則 0631），pH 值應(yīng)為 5.5～6.5。

3.3.3.2 溶液的澄清度與顏色

取本品，用水制成每 1ml 中約含人生長激素 1.6mg 的溶液（規(guī)格低于該濃度的成品可不經(jīng)稀釋直接作為供試品溶液），依法檢查（通則 0901 第一法和 0902 第一法），溶液應(yīng)澄清無色；如顯渾濁，與 2 號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃。

3.3.3.3 相關(guān)蛋白質(zhì)

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗(yàn)。

對照品溶液 取人生長激素對照品適量，加水制成每 1ml 中含人生長激素 1.6mg 的溶液。

供試品溶液 取本品，用 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液稀釋成每 1ml 中含人生長激素1.6mg 的溶液；規(guī)格低于該濃度的成品可不經(jīng)稀釋直接作為供試品溶液。

系統(tǒng)適用性溶液 取 30%過氧化氫溶液 5μl，加水稀釋至 100ml，作為溶劑。另取人生長激素對照品適量，用溶劑制成每 1ml 中含人生長激素 1.6mg 的溶液，放置 1～7 天，以得到適量的甲硫氨酸氧化形式。 

空白溶液 照成品處方制備不含人生長激素的輔料溶液。

對照品溶液、供試品溶液、系統(tǒng)適用性溶液、空白溶液均于 2～8℃保存，24 小時(shí)內(nèi)使用。

色譜條件 采用末端封尾的十八烷基硅烷鍵合硅膠填充的色譜柱（4.0mm×250mm、7μm、孔徑 100nm），柱溫為 45℃；取硫酸銨 82.6g 和磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）34.5g，加水 2950ml 溶解后再加入高氯酸 25.0ml 和乙腈 2000ml，混勻后加水稀釋至 5000ml，作為流動(dòng)相 A；乙腈-水（4:1）為流動(dòng)相 B，按下表進(jìn)行梯度洗脫；流速為每分鐘 1.0ml；檢測波長為 215nm；進(jìn)樣體積 20μl。

系統(tǒng)適用性要求 調(diào)節(jié)流動(dòng)相比例，使系統(tǒng)適用性色譜圖中人生長激素主峰保留時(shí)間約為 40 分鐘；在系統(tǒng)適用性色譜圖中，[MetO14]人生長激素與人生長激素主峰的相對保留時(shí)間約為 0.9。 [MetO14] 人生長激素色譜峰的峰高與該峰和人生長激素主峰之間的峰谷高之比應(yīng)不低于 2.0。在空白溶液色譜圖中應(yīng)無干擾峰。

測定法 取供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。在供試品溶液記錄的色譜圖中，扣除空白溶液相對應(yīng)的峰，除主峰外的其他峰均視為相關(guān)蛋白峰，按峰面積歸一化法計(jì)算相關(guān)蛋白質(zhì)含量。限度 不得大于 10.0%。

3.3.3.4 電荷變異體

照毛細(xì)管電泳法（通則 0542）測定。

對照品溶液、系統(tǒng)適用性溶液、靈敏度溶液、磷酸鹽緩沖液 照 3.1.3.3 項(xiàng)下同法配制。

供試品溶液 取本品，用水溶解并稀釋成每 1ml 約含人生長激素 1mg 的溶液。

空白溶液 按制劑處方和供試品溶液中終濃度，制備不含人生長激素的輔料溶液。

電泳條件 同 3.1.3.3 項(xiàng)下電泳條件。系統(tǒng)適用性要求 除滿足 3.1.3.3 項(xiàng)下系統(tǒng)適用性要求外，在空白溶液記錄的電泳圖中，應(yīng)無干擾峰。 

測定法 按 3.1.3.3 項(xiàng)下的條件試驗(yàn)，忽略空白溶液峰，按校正峰面積（峰面積與遷

移時(shí)間之比）歸一化法計(jì)算總電荷變異體含量。

限度 不得過 25.0%。

3.3.3.5 高分子蛋白質(zhì)

取本品，照 3.1.3.2 項(xiàng)下的方法試驗(yàn)并計(jì)算。

限度 不得大于 4.0%。

3.3.3.6 裝量

依法檢查（通則 0102），應(yīng)不低于標(biāo)示量。

3.3.3.7 可見異物

依法檢查（通則 0904 第一法），應(yīng)不得檢岀金屬屑、玻璃屑或最大粒徑超過 2mm纖維和塊狀物等明顯外來的可見異物。

3.3.3.8 不溶性微粒

依法檢查（通則 0903），每份容器中含 10μm 及 10μm 以上的微粒數(shù)不得過 6000 粒；含 25μm 及 25μm 以上的微粒數(shù)不得過 600 粒。

3.3.3.9 滲透壓摩爾濃度

依法測定（通則 0632），應(yīng)符合經(jīng)驗(yàn)證并批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)。

3.3.3.10 無菌

依法檢查（通則 1101 薄膜過濾法），應(yīng)符合規(guī)定。

3.3.3.11 細(xì)菌內(nèi)毒素

依法檢查（通則 1143），每 1mg 人生長激素中含細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)小于 5.0EU。

3.3.3.12 異常毒性

取本品，加氯化鈉注射液或滅菌注射用水制成 1ml 中約含人生長激素 1.6mg 的溶液（規(guī)格低于該濃度的成品可不經(jīng)稀釋直接作為供試品溶液），依法檢查（通則 1141 小鼠試驗(yàn)法），應(yīng)符合規(guī)定。

3.3.3.13 抑菌劑

如在成品生產(chǎn)過程中使用防腐劑，應(yīng)按照經(jīng)驗(yàn)證并批準(zhǔn)的方法檢查，并符合規(guī)定。

3.3. 4 生物學(xué)活性

每年至少測定 1 次。依法測定（通則 3537），應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)品的 70%～140%。

3.3.5 含量

供試品 取本品，加 0.025mol/L 磷酸鹽緩沖液制成每 1ml 中約含人生長激素 1.0mg的溶液。

對照品溶液、色譜條件、系統(tǒng)適用性要求與測定法 見 3.1.4 項(xiàng)。

限度 含人生長激素應(yīng)為標(biāo)示量的 90.0%～110.0%。

4 保存、運(yùn)輸及有效期于 2～8℃避光、密閉保存和運(yùn)輸。

5 使用說明

應(yīng)符合生物制品分包裝及貯運(yùn)管理（通則 0239）規(guī)定和批準(zhǔn)的內(nèi)容。